Untersuchungen zu Enterococcus faecalis als möglicher Faktor zur Entstehung der amyloiden Arthropathie der braunen Legehenne

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1 Aus dem Institut für Geflügelkrankheiten des Fachbereichs Veterinärmedizin der Freien Universität Berlin Leiter: Prof. Dr. H.M. Hafez und dem Veterinärlabor der Lohmann Tierzucht GmbH, Cuxhaven Untersuchungen zu Enterococcus faecalis als möglicher Faktor zur Entstehung der amyloiden Arthropathie der braunen Legehenne Inaugural-Dissertation zur Erlangung des Grades eines Doktors der Veterinärmedizin an der Freien Universität Berlin vorgelegt von Birgit Rudolph geb. Kühndel Tierärztin aus Ludwigsfelde Berlin 2004 Journal-Nr. 2846

2 Gedruckt mit Genehmigung des Fachbereichs Veterinärmedizin der Freien Universität Berlin Dekan: Univ.-Prof. L. Brunnberg Erster Gutachter: Zweiter Gutachter: Dritter Gutachter: Univ.-Prof. H.M. Hafez Univ.-Prof. W. Müller Prof. G. Monreal Tag der Promotion: 22. Oktober 2004

3 Meiner Familie

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5 INHALTSVERZEICHNIS 1 Einleitung 1 2 Literaturübersicht Definition Geschichte, Vorkommen und Bedeutung Ätiologie Enterokokken Taxonomie Morphologie Eigenschaften Bedeutung der Enterokokken beim Menschen Vergleich der Isolate Epizootiologie Symptome und Verlauf Pathologisch-anatomische Veränderungen Histopathologische Veränderungen Diagnose Isolierung Indirekter Nachweis Differentialdiagnosen Bekämpfungsmaßnahmen Therapie Prophylaxe 19 Eigene Untersuchungen 3 Material und Methoden Teil 1 - Keimisolierung und -charakterisierung Material Bakterien-Isolate 20 I

6 Medien, Puffer und Geräte Versuchstiere und Bruteier Methoden Isolierung Charakterisierung Stoffwechselparameter Biochemische Eigenschaften Resistenztest Untersuchung zur Feststellung der Antigenverwandtschaft der verschiedenen Isolate Herstellung des Antigens Herstellung der positiven Kontrollseren Durchführung der Agargelpräzipitation Pulsfeld-Gelelektrophorese (PFGE) Nachweis des Pathogenitätsgrades der Isolate Nachweis des Pathogenitätsgrades der Isolate an Bruteiern Nachweis des Pathogenitätsgrades der Isolate an Versuchstieren Teil 2 - Herstellung eines indirekten enzymgebundenen Immunoadsorptionstests (ELISA) für serologische Untersuchungen Material Seren Positivkontrollseren Negativkontrollseren Andere Seren zur Prüfung der Spezifität des ELISA Medien, Puffer und Geräte für den ELISA Methoden Herstellung der Positivkontrollseren Herstellung der ELISA-Antigene Beschichtung der ELISA-Platten Testdurchführung 41 II

7 Interpretation der ELISA-Werte Korrektur der ELISA-Werte Prüfung der Spezifität des ELISA Reproduzierbarkeit Innerhalb einer Platte (Intraassay-Differenzen) Zwischen verschiedenen Platten (Interassay-Differenzen) Test der Lagerfähigkeit der ELISA-Platten Teil 3 - Serologische Untersuchungen zum Vorkommen von Antikörpern gegen Enterococcus faecalis in Geflügelbeständen Material Seren für Verlaufsuntersuchungen bei Legehennen unter Praxisbedingungen Seren und Dotter für diagnostische Untersuchungen Testplatten Methoden Statistische Auswertung 46 4 Ergebnisse Ergebnisse zu Teil Charakterisierung Stoffwechselparameter Biochemische Eigenschaften Resistenztest Agargelpräzipitation Pulsfeld-Gelelektrophorese Ergebnisse der Bestimmung des Pathogenitätsgrades der Isolate Ergebnisse der Pathogenitätstests im Brutei Ergebnisse der Pathogenitätstests im Versuchstier Vergleich der Ergebnisse der einzelnen Charakterisierungsmethoden 59 III

8 4.2 Ergebnisse zu Teil Prüfung der Spezifität des selbsthergestellten indirekten ELISA Reproduzierbarkeit Innerhalb einer Platte (Intraassay-Differenzen) Zwischen verschiedenen Platten (Interassay-Differenzen) Test der Lagerfähigkeit der ELISA-Platten Ergebnisse zu Teil Verlauf der OD von zwei Legehennenherden unter Praxisbedingungen Diagnostische serologische Untersuchungen 72 5 Diskussion 73 6 Schlußfolgerung 83 7 Zusammenfassung 84 8 Summary 85 9 Literaturverzeichnis Anhang 98 IV

9 Abkürzungsverzeichnis Abb. Abbildung AGP Agargelpräzipitation AI aviäre Influenza bidest. bidestillata bzw. beziehungsweise ca. circa CELO Chicken Embryo Lethal Orphan = FAV 1 D Deutschland d.h. das heißt dest. destillata DNS Desoxyribonukleinsäure E. Enterococcus E. coli Escherischia coli EDTA ethylenediaminetetraacetic acid (deutsch = Ethylendiamintetraessigsäure ELISA Enzyme-linked Immunosorbent Assay Ergeb. Ergebnisse FAV 1 Fowl Adenovirus CELO h Stunden HE hämorrhagische Enteritis der Puten i.m. intramuskulär i.v. intravenös IB Infektiöse Bronchitis IBD Infectious Bursal Disease Kb Kilobasenpaare KBE Kolonie-bildende Einheiten MG Mycoplasma gallisepticum MHK minimale Hemmkonzentration min Minute MM Mycoplasma meleagridis

10 MS n n.b. n.d. neg. Nr. n.u. OD p.i. Pm PBS PFGE PMSF pos. RNS RT s.c. SD SE s.o. sog. SPF Str. Tab. TBE TE TRT typ. U u.a. v.a. X Mycoplasma synoviae Anzahl nicht bekannt nicht durchgeführt negativ Nummer nicht untersucht Optische Dichte post infectionem Pasteurella multocida phosphate buffered saline Pulsfeld-Gelelektrophorese Phenylmethylsulfonylfluorid positiv Ribonukleinsäure Raumtemperatur subkutan Standardabweichung Salmonella enteritidis siehe oben sogenannte spezifisch pathogenfrei Streptococcus Tabelle Tris-Borat-EDTA Tris-EDTA Turkey Rhinotracheitis typisch Umdrehungen unter anderem vor allem Mittelwert